atto發(fā)光檢測裝置的應(yīng)用

發(fā)布日期：2023-11-14      瀏覽次數(shù)：623

atto發(fā)光檢測裝置的應(yīng)用

基因表達(dá)測量和報告基因檢測到ATP和活性氧測量 - 發(fā)光檢測設(shè)備的應(yīng)用

化學(xué)發(fā)光和生物發(fā)光廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域，從 ATP 測定和活性氧/抗氧化能力測量到使用熒光素酶作為報告基因的基因表達(dá)分析。ATTO 的發(fā)光檢測設(shè)備與從微孔板到試管和培養(yǎng)皿的各種樣品格式兼容，并用于生命科學(xué)的前沿。

發(fā)光測量設(shè)備清單

型號/產(chǎn)品名稱	AB-2550 計時迪奧	AB-2350 費利奧斯	AB-2270 八角發(fā)光傳感器
樣品數(shù)量	8個樣品	96/384 個樣本	1 個樣品
探測器	光電倍增管（PMT）	光電倍增管（PMT）	光電倍增管（PMT）
檢測方法	光子計數(shù)	光子計數(shù)	光子計數(shù)
容器	φ35mm培養(yǎng)皿	微孔板96孔/384孔	φ12mm x 55mm管 1.5mL離心管
溫控功能	室溫-5℃～45℃	室溫+5℃～40℃	室溫+5℃~40℃（可選）
CO2氣體介紹	○（5%調(diào)整）	×	×
保濕	○	×	×
試劑分配	×	○	○
分色功能	○	○	○
設(shè)備控制	電腦控制	電腦控制	主體面板

報告基因檢測

報告基因檢測是基因表達(dá)分析方法之一，當(dāng)使用熒光素酶作為報告基因時，稱為熒光素酶檢測。通過使用熒光素酶進(jìn)行基因表達(dá)分析，可以根據(jù)發(fā)光量來定量檢測目標(biāo)基因的表達(dá)水平。



熒光素酶測定（單次）

一種基本的熒光素酶測定方法。許多都以套件形式提供。由于細(xì)胞活性和數(shù)量等問題，比較樣本之間的數(shù)據(jù)可能很困難。因此，存在允許提供內(nèi)標(biāo)的雙熒光素酶測定的趨勢。

雙熒光素酶測定

這是一種使用兩種類型的熒光素酶基因的熒光素酶測定。通過將目標(biāo)基因的啟動子與第一熒光素酶基因連接，并通過將穩(wěn)定表達(dá)的基因的啟動子與第二熒光素酶基因連接來進(jìn)行測定，使用第二熒光素酶作為內(nèi)標(biāo)和樣品，這增加了分析的可靠性。之間的數(shù)據(jù)比較 由于使用了兩種類型的熒光素酶，因此必須添加兩次具有不同最佳條件的發(fā)光底物。

多色熒光素酶測定

這是一種使用兩到三種類型的熒光素酶基因的熒光素酶測定。對于三種類型的熒光素酶，可以通過一次添加一種類型的發(fā)光底物來測量所有基因表達(dá)。因此，可以測量同一樣本中的內(nèi)標(biāo)和兩類基因的表達(dá)。另外，不存在因條件變化而導(dǎo)致發(fā)光量變化的問題。由于同時發(fā)出三種顏色，因此儀器需要分色測量機(jī)構(gòu)。各種熒光素酶測定的測壓儀兼容性表

熒光素酶測定（活細(xì)胞測定）

這是一種在培養(yǎng)細(xì)胞的同時測量細(xì)胞而不破壞細(xì)胞的方法。通過使用添加了降解促進(jìn)信號（例如PEST序列）的熒光素酶基因，可以縮短細(xì)胞內(nèi)熒光素酶的壽命，從而提高其跟蹤啟動子活性變化的能力。

這是一種在培養(yǎng)細(xì)胞的同時測量細(xì)胞而不破壞細(xì)胞的方法。通過使用添加了降解促進(jìn)信號（例如PEST序列）的熒光素酶基因，可以縮短細(xì)胞內(nèi)熒光素酶的壽命，從而提高其跟蹤啟動子活性變化的能力。

各種熒光素酶測定的測壓儀兼容性表

測量方法	AB-2270	AB-2270-R	AB-2350	AB-2550	AB-3000B
熒光素酶測定	○	○	○	○	○
雙熒光素酶測定	○	○	○	×	×
多色熒光素酶測定	○	○	○	○	○
活細(xì)胞測定	×	×	△	○	○























活性氧測量

活性氧測量



應(yīng)用實例

• 中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活性氧產(chǎn)生能力的評價

• 活性氧清除系統(tǒng)（超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等）的測量

• 活性氧生成系統(tǒng)（NAD(P)H氧化酶、氧化酶等）的測定

用于發(fā)光測量的測壓儀兼容性表

測量方法	AB-2270	AB-2270-R	AB-2350	AB-2550
活性氧測量	○	△	○	○

*：對于 AB-2270/AB-2270-R，我們建議添加可選的溫度控制功能。

抗氧化能力測量



■抗氧化能力測量的基本概念 (a)：[用產(chǎn)生一定量超氧化物的系統(tǒng)（例如次氧化酶系統(tǒng)）測量發(fā)光強(qiáng)度] (b)：[將抗氧化劑樣品添加到 (a) [測量添加后的發(fā)光強(qiáng)度] 根據(jù)這兩個值計算抑制率。

抑制率(%)=[1-(b)/(a)]×100

用于發(fā)光測量的測壓儀兼容性表

測量方法	AB-2270	AB-2270-R	AB-2350	AB-2550
抗氧化測量	○	△	○	△